標題: Cyclin 家族新成員:人類cyclin I之選殖、摺疊與功能分析
Cloning, folding and function analysis of human cyclin I protein: a new member of cyclin family
作者: 朱學亮
張家靖
分子醫學與生物工程研究所
關鍵字: 細胞週期調節蛋白 I;蛋白質摺疊;細胞凋亡;無特定結構蛋白質;cyclin I;protein refolding;apoptosis;disorder protein
公開日期: 2006
摘要: 細胞週期調節蛋白 (Cyclins) 是一群調節細胞週期的蛋白質,cyclin depend kinases (CDK) 與cyclins結合後,會活化cyclins,cyclin-CDK複合體即可調控細胞週期,而在特定之細胞時期結束後,cyclins會經由ubiqutin系統降解。Cyclin I,是於1995年由研究學者Nakamura T等人所發現的一個新的cyclin成員,cyclin I在N端有典型的cyclin box,C端則有幫助蛋白質降解的PEST序列。其cyclin box序列與cyclin G、cyclin E有高度相似性。跟一般典型的cyclin不同之處在於cyclin I的mRNA在有絲分裂後之組織中 (post-mitotic tissues) 大量表現,包括心臟、腦、以及肌肉細胞,並且在細胞週期中也持續表現,這亦指出了人類cyclin I 的功能或許與細胞週期調控並無直接關聯。最近的研究指出,Cyclin I可以藉由穩定p21來保護腎臟足細胞 (kidney podocytes) 免於細胞凋亡(apoptosis)。顯示cyclin I的功能可能是調節其相關鍵結蛋白質之功能,因此本研究將針對其結構與其蛋白質-蛋白質間之交互作用為研究標的。在本實驗室中,我們clone人類cyclin I基因,並且利用大腸桿菌大量表現此一蛋白質,最後以逐步透析法來重新摺疊蛋白質。藉由圓二色光譜儀 (Circular Dichroism,CD) 分析,可發現cyclin I的二級結構大部分為α-螺旋,微溫差掃描熱卡路里計 (Differential Scanning Calorimetry, DSC) 測量得知cyclin I屬於鬆散結構,我們利用Far western blot實驗,證實cyclin I會與p21cip1/waf1鍵結,因此我們推測cyclin I可能藉由結合p21來調控其活性。
URI: http://140.113.39.130/cdrfb3/record/nctu/#GT009429506
http://hdl.handle.net/11536/81515
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